維生素預混料中維生素B12的測定

1 范 圍
本標準規(guī)定了 用 液 相色譜法測定 維生素預混料中維生素 B 1 2 的 方法。
本 標 準 適用 于 維 生素 預 混 料、維生素B , z 預混制劑中維生素B , z 的測定。 檢測范圍為每 千 克樣 品 中 維
生 素B , 含 量 大 于 。 . 2 5  m g ,
方法原理
試樣中 維生素B用 水 提 取， 經(jīng) 液相 色 譜 反 相 柱 分 離， 其峰面積與維生素B , 。 的 含 量成正 比
試劑 和材料
本標準所用試 劑除特殊注明 外 ， 均為 優(yōu)級純， 水為 去離子水。
11 乙睛: 色 譜純。
3 . 2 正磷 酸溶 液
3 .  3  2 5 %乙 醇溶液
3 . 4 維生素B , 標 準 溶 液。
3 . 4 .  1 維 生 素B 。 標 準 貯 備 溶 液: 準 確 稱 取 。 . 1 0 0 0 g 維 生 素B , : 純 品 （ 符 合U S P ）  , 溶 解 于 1 0 0  M I 乙 醇
溶 液（ 3 . 3 ） 中 ， 并 稀 釋 定 容 至 刻 度， 搖勻 。 該 標 準 貯 備 液 每 毫 升 含 維 生 素B , , I  m g .
3 . 4 . 2 維 生 素B ,  z 標 準 工 作 液: 準 確 吸 取 維 生 素B , z 標 準 貯 備 液（ 3 .  4 .  1 ） 1  m L 于 5 0  M I 容 量 瓶 中 ， 用 移
動 相 稀 釋 定 容 刻 度， 搖 勻。 該 標 準 工 作 液 1  M I 含 維 生 素B V 2  （ A g e
4 儀器、 設備
4 . 1 實驗室 常用 設備。
4 . 2 超聲波水浴 。
4 . 3 液相色譜儀 ， 帶動進樣器， 紫外可調(diào)波長檢測器。
4 . 4 超純水裝置
4 . 5 離心機: 3  0 0 0  r / m i n .
5 試 樣制備
取 具 有 代 表 性 樣 品 至 少 5 0 0  g ， 用 四 分 法 縮 分 至 1 0 0  g ， 粉 碎 · 圣 部 過 0 .  2 8  m m 孔 卜 混 勻 ， 裝 入 樣 品
瓶內(nèi) 密閉， 避光低 溫保存?zhèn)溆谩?br />6 分析步驟
6 . 1 提 取
6 . 1 . 1 維生素 預混料中 維生素 B 。 的提取
稱 取 試 樣 2 ^ - 3  g （ 精 確 至 士 。 .  0 0 0  1  g  ） ， 置 于 1 0 0  m L 棕 色 容 量 瓶 中 ， 加 約 6 0  m L 去 離 子 水， 在 超 聲
波水 浴中 超聲 提 取 1 5  m i n ， 取出 ， 用 去 離 子水 定 容至 刻 度， 混 勻， 過濾， 濾液 過 。 . 4 5  f a m濾膜， 供高 效 液
相色 譜儀分析。
6 . 1 . 2 維 生 素B 二 制 劑 （ 1 % - 2 % ） 的 提 取
稱 取 試 樣 1  g （ 精 確 至 士 。 0 0 0  1  g ） 于 1 0 0  m L 棕 色 容 量 瓶中 ， 加 人 約 6 0  m L 去 離 子 水， 在 超 聲 波 水
浴中 超 聲 提 取 1 0  m i n ， 取出 用 去 離 子水 定容 過 濾。 精 確吸 取 1 .  0 0  m L 溶 液于 5 0  m L 棕色 容 量瓶中， 用 去
離 子 水 定 容 至 刻 度， 該 液 通 過 。 . 4 5  p m濾 膜過 濾， 供 高 效液 相 色 譜 儀 分 析
6 . 2 測 定步驟
6 . 2 . 1 色譜條件
柱 子: p . - B o n d p a k  N H , , 粒 度 5  p m , 3 . 9  m m  X 3 0 0  m m .
柱溫: 3 0  C 。
流 動 相: 3 % 正 磷酸 水 溶 液 2 6 0  m L 與 7 0 0  m L 乙 膀 混合， 超 聲 脫 氣。
流 速: 1 .  7  m L / m i n ,
檢 測 波 長: 3 6 1  n m ,
6 . 2 . 2 定量測 定
按液相色譜儀說明 書 調(diào)整 儀器 操 作 參 數(shù)， 用 兩 次以 上 相應 標 準 工 作液， 對 系 統(tǒng) 進行 校 正。
將 通 過 。 . 4 5  p = 濾 膜的 樣 液 （ 6 . 1 . 1 ） 依 次 分 裝 于自 動 進 樣 小 瓶 中 ， 依 外 標 法 上 液 相 色 譜 儀 測 定
6 . 2 . 3 也 可 采 用 反 相 離子 對 高 效液 相 色 譜 測 定 維 生 素 B , , 的 方 法（ 見 附 錄 A ）
7 測定結果的計算
M i l 定結果按式（ 1 ） 計算
m;=
P ; X V  X  p ; X V ?
尸 。 ， X 艦 X V
· · · · · 。 . · · · · · · · · . · · · · 。 . · · · · 一 （1）
式中: . ; 一 一 每 千克 樣品 中 維生 素 B , : 的 含 量， m g ;
m - 一 試 樣 質(zhì) 量， g +
V ; - 一 試 樣 溶 液 進 樣 體 積, p L ;
尸 . - 一 試樣 溶 液 峰面 積 值;
V - 一 試樣稀 釋的 體積， m L ;
P - 一 標 準 溶 液 濃 度， p g / m L  ;
v ， - 一 標 準 溶液 進 樣 體 積, p L ;
P , - 一 標 準 溶 液 峰 面 積 平 均 值。
每 個 試 樣 取 兩 份 試 料 進 行 平 行 測 定， 以 其 算 術 平 均 值為 測 定 結 果 。 結 果 表 示 到 每 千 克 樣 品 中 維 生 素
B , , O .  0 1  m g
8 允許差
同 一 分析 者對同一 試樣同 時 兩次平行測定結果的 相對偏差應不大于1 5 %。（色譜儀器網(wǎng)）